电生理

Time:2018-07-17Views:5111


膜片钳 

突触的可塑性一方面直接反映在突触形态的改变,同时也表现为突触后电流(PostSynaptic Current)的变化。神经生物学中常用膜片钳电生理的方法来记录突触后电流。

膜片钳技术的基本方法是用特制的玻璃微电极(尖端直径在微米量级)贴附在细胞表面,施加负压使电极与细胞之间形成电阻为10^9欧姆量级的紧密封接。在实 验中,向玻璃电极中加入某些特定的抗生素,如两性霉素B,可以使细胞膜穿孔,细胞内液和电极内液连通,这样记录到的玻璃管电极内与细胞所处的浴液之间的电 势差即为细胞的膜电位,这就是穿孔膜片钳技术。

穿孔全细胞膜片钳有效地避免了洗脱作用,胞质渗漏极为缓慢,可以进行长时间稳定的记录;同时还具有对细胞损伤小的优点。抗生素穿孔形成的孔道,分子直径大 于0.8nm的离子和分子不能通过,而所有的单价离子都可通过,这些孔道没有电压依赖性,同时使得记录过程不受电极钳制电位的影响。

膜片钳技术不仅可以直接记录到突触电流的改变,通过向电极内给药,可以检测不同药物对神经元突触可塑性的影响;其与荧光钙染、光刺激、双光子成像等相结 合,还可以进一步观察神经元之间突触联系形成的网络拓扑结构,测量突触联系的权重等等,以对可塑性及网络回响进行更深入的研究。

多电极阵列 

我们通过研究神经网络的可塑性来试图发现学习记忆的本质,我们用微电极阵列(MEA)来记录神经网络的活动。MEA记录系统是在直径小于5mm的微区玻璃 表面点阵状排列60个TiN材料电极,离体组织、细胞或者切片都可以直接紧密地置于MEAs上。而且MEA的电极即可用于记录也可用作刺激或者接地,并与 放大器和计算机相连,能无创性同步记录60个位点的细胞外电位信号或进行持续的刺激。

由于MEA的底部是透明的,我们就可以把它安放在倒置显微镜上以观察神经网络的形态和神经元的细微结构。在MEA上培养的神经元能生长几周甚至几个月的时 间。因此,我们在MEA上培养胚胎大鼠的海马神经元,它们能比较快的形成相互联系的神经网络,我们就可以通过TiN电极来探听神经元之间的交流。